克侵灵对禽流感H9N2病毒感染肉鸡的保护试验

许家荣¹  丁桂莲²   崔盼娣¹  林海燕²  徐彦文¹  王淑彩²

（1、南京农业大学动物医学院；2、广东溢多利生物科技股份有限公司）

 摘要：用中草药饲料添加剂“克侵灵”对禽流感H9N2病毒感染肉鸡的保护试验。试验用1日龄AA鸡320只随机分成不感染对照组、感染对照组、疫苗对照组、西药对照组、0.1％克侵灵组、0.2％克侵灵组、0.1％克侵灵＋疫苗组、0.2％克侵灵＋疫苗组。试验结果表明：（1）“克侵灵”、 AIV H9N2灭活疫苗、80ppm盐酸金刚烷胺都能使鸡抵抗AIV（H9N2）的攻击，实验鸡攻毒后不产生临床症状。（2）与对照组相比，添加剂克侵灵使用组能显著增加鸡的体重。（3）80ppm盐酸金刚烷胺对试验鸡的生长有抑制作用。（4）中草药添加剂“克侵灵”对免疫学指标、生产性能的影响需有一定的时间。（5）不感染对照组与感染对照组一起饲养，不发生临床症状。从免疫学指标看各日龄段均未检出AIV H9N2 抗体。（6）AIV H9N2灭活疫苗能显著提高实验鸡抗体水平，0.1%“克侵灵”和0.2%“克侵灵”都能显著增强AIV H9N2灭活疫苗的抗体水平，但它们之间的差异不显著。（7）使用中草药添加剂“克侵灵”的条件下，AIV H9N2灭活疫苗对实验鸡体重的影响不明显。所以，用中草药添加剂“克侵灵”预防AIV（H9N2）有提高抗体水平、提高生产性能及降低应激的优势。

关键词：克侵灵 ；禽流感（AIV）；攻毒 ；免疫抗体；生产性能

随着养殖业的飞速发展, 消费者对畜禽产品的品质要求越来越高。特别是我国加入WTO以后, 进出口畜禽产品要按照国际检验标准, 对畜禽产品质量、卫生和安全等提出了更高标准。而为了提高畜禽的生产性能，目前在饲料中普遍使用人工合成的饲料添加剂如抗生素、促长素、激素等^[1]。但在饲料中使用过多的抗生素和药物添加剂, 不仅导致细菌产生耐药性, 而且残留在畜禽产品中的药物会诱发人类DNA 结构的改变,造成严重后果^[2]。而中草药作为饲料添加剂不仅具有改善机体代谢、促进生长发育、提高免疫功能及防治畜禽疾病等多方面的作用，而且还具有抗生素无法具备的优点:毒副作用小、不产生抗药性或抗药性很小、无残留，既做到防病治病, 又能促进生长、提高生产性能^[3]。我国中草药资源丰富, 发展中草药添加剂有着巨大的潜力。广东溢多利生物科技股份有限公司根据中医理论将山楂、六神曲、麦芽等多味中草药加工处理制成了“克侵灵”药物饲料添加剂，用于预防禽流感，提高免疫力及促进家禽生长。为了探讨该中草药饲料添加剂对动物免疫能力及生产性能的影响，为科学合理、有效地使用该添加剂提供准确的数据，设计并进行了如下试验。

1    试验材料

1.1  试验动物：1日龄AA鸡320只（购自江苏省南京市青龙山养鸡场）。

1.2  试验药物：

    克侵灵（批号20050320、广东溢多利生物科技股份有限公司）、盐酸金刚烷胺（批号 20050212、南京农业大学动物药厂）。

1.3  试验疫苗：

    ND弱毒活疫苗（批号 20050123、南京药械厂）、IBD中等毒力活疫苗（批号 20050112、梅里亚动物保健品有限公司）、AIV（H9N2）灭活疫苗（批号 20050312、梅里亚动物保健品有限公司）。

1.4  试验毒株：

    AIV（H9N2）毒株，由南京农业大学动物医学院传染病教研组分离、鉴定并保存。经测试该毒株对10日龄SPF鸡胚的ELD₅₀为10^-7/0.2ml。收集AIV（H9N2）毒株接种的鸡胚尿囊液保存。

1.5  基础日粮：不含任何药物成分的自配全价粉料。

2    试验方法

2.1  试验设计和分组

    1日龄AA鸡320只，平均体重47±1.5g/只，AIV H9N2母源抗体平均效价为2^6±1，（组间平均个体初重和AIV H9N2母源抗体水平差异不显著），随机分成8组，每组2栏×20只，18日龄后每组4栏×10只，采用层叠式笼饲养。试验设计分组见表1。

表1   试验设计分组表

2.2  饲养管理：

从1日龄起，克侵灵试验组按相应试验浓度添加克侵灵混饲，不给药组饲喂基础日粮，西药对照组（盐酸金刚烷胺，80ppm，给药时间19-26日龄），饲养动物（注意拌料均匀）；按免疫程序进行疫苗接种，自由采食及饮水，勤观察鸡只的临床症状。

 2.3  免疫程序：

全部试验鸡只均于7日龄免疫ND，13日龄免疫IBD。AIV（H9N2）灭活疫苗仅用于免疫试验组鸡只，11日龄首免、35日龄二免（非免疫试验组鸡只同时接种用于平衡接种应激的安慰剂）。

 2.4  试验攻毒：

经预试验确定合理AIV(H9N2)攻毒剂量为10⁷ ELD₅₀/0.2mL鸡胚尿囊液。第1组不攻毒但与攻毒组一起饲养自然感染，第2-8组，22日龄攻毒AIV（H9N2）鸡胚尿囊液腿部肌注，剂量为每只10⁷ELD₅₀/0.2ml。试验全期各组按表1饲喂相应全价饲料。

2.5  试验称重：在1、7、18、27、35、45日龄时称量体重（早上空腹，每组随机抽取20只鸡进行）。

2.6  抗体检测：

5日龄前杀鸡采血，5日龄后翅膀采血。采集1、18、27、35、45日龄血液，分离血清，用血凝抑制（HI）试验检测 AIV（H9N2）抗体检测（检测用抗原购自哈尔滨兽医研究所，批号 20041208）。

2.7  临床症状观察：每天4次观察鸡的（呼吸、鼻涕、拉稀）临床症状表现。

2.8 试验记录和结果统计

2.8.1 免疫抗体效价：采集1、18、27、35、45日龄血液，分离血清，检测抗体效价。

2.8.2 生产性能

    每天记录每组采食量，在1、7、18、27、35、45日龄时的个体称重，计算试验各阶段和全期平均日增重、采食量和料肉比。

用SPSS软件对试验结果进行统计学分析。

3    试验结果与分析

3.1  临床表现观察结果

表2  攻毒后3天鸡群的临床表现

由表2各试验组攻毒后临床表现观察结果比较显示：

（1）试验1组不感染对照组与感染对照组一起饲养，不发生临床症状，表明“0.2％克侵灵”能抵抗AIV H9N2 的水平自然感染。

（2）其余2～8组，攻毒后3天只有试验2组表现出了呼吸困难，流鼻液，拉稀症状，其他各组试验鸡攻毒后不产生临床症状。结果表明接种AIV H9N2 灭活疫苗、80ppm盐酸金刚烷胺用药、0.1%、0.2%克侵灵混饲均可预防H9N2病毒对肉鸡机体的侵害，有效率为100％。

3.2  免疫学结果

表3  试验各组不同日龄禽流感HI抗体效价

注：同列中肩标有相同字母的数值为差异不显著（P>0.05），字母不相同者为差异显著（P<0.05），字母相隔者为差异极显著（P<0.01）。

由表3各试验组抗体效价研究比较显示：

（1）试验1组不感染对照组与感染对照组一起饲养，水平自然感染免疫。从免疫抗体指标看18日龄禽流感HI抗体效价为2^0.5，其余27、35、45日龄均未检出AIV H9N2 抗体。结果表明“0.2％克侵灵”混饲组未受到野毒自然感染。

（2）试验各组间18日龄禽流感HI抗体效价差异均不显著（P>0.05），27、35、45日龄3、7、8比2组抗体效价均有增加，且随日龄的增长差异越显著。结果表明AIV H9N2 灭活疫苗、0.1%、0.2%克侵灵混饲对免疫学指标的影响需要一定的时间。

（3）对27、35、45日龄3、7、8组与感染组对照2组的抗体效价进行研究比较显示：27日龄，试验3、8组显著高于感染对照2组（P<0.05），试验7组比感染对照2组有所提高，但差异不显著（P>0.05），试验7、8组与试验3组相比差异不显著（P>0.05）；35日龄，试验3、7、8组显著高于感染对照2组（P<0.05），分别升高76%、132%、164%，试验7、8组均显著高于试验3组（P<0.05）；45日龄，试验3、7、8组极显著高于试验2组（P<0.01），分别升高436%、550%、521%，试验7、8组均显著高于试验3组（P<0.05）。结果表明AIV H9N2灭活疫苗能显著提高实验鸡抗体水平；0.1％、0.2％克侵灵均能显著增加AIV H9N2灭活疫苗的抗体水平，并随着日龄的增长，增加的差异越显著。

（4）各日龄试验8组和7组相比，禽流感HI抗体效价均提高，但是差异不显著（P>0.05），结果表明0.1%“克侵灵”和0.2%“克侵灵”都能显著增强AIV H9N2灭活疫苗的抗体水平，但它们之间的差异不显著（P>0.05）；产生同等免疫增强效果的最小“克侵灵”剂量有待进一步研究。

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